ПЦР-ТЕСТ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ОНИХОМИКОЗА (PCR-BASED TEST FOR THE DIAGNOSIS OF ONYCHOMYCOSIS)

Лавникевич Д.М., Медведева Т.В., Чилина Г.А., Васильева Н.В., Полищук А.Г.
Lavnikevich D.M., Medvedeva T.V., Chilina G.A., Vasiljeva N.V., Polischouk A.G.

Author address: 

НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
Kashkin Research Institute of Medical Mycology, North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia

Abstract: 

На сегодняшний день практически нет чувствительных методов выявления спектра патогенных грибов-возбудителей онихомикоза. Применяемые культуральные и гистологические методы недостаточно чувствительны, а, кроме того, трудоемки и занимают продолжительное время.

Цель исследования - разработка и оценка мультиплексного ПЦР-теста для обнаружения и идентификации патогенных грибов, наиболее часто встречаемых у пациентов с онихомикозом в Санкт-Петербурге.

Материалы и методы. Метод разрабатывался для определения принадлежности патогенных грибов, выделенных из патологического материала, к одному из четырех родов Trichophyton - как представителю дерматомице-тов и Aspergillus, Fusarium и Candida - как представителям недерматомицетов. Кроме того, ПЦР-тест дает ответ, присутствует ли в клиническом материале какая-либо грибная ДНК. Наличие грибов определяли в двух параллельных мультиплексных реакциях: в первой реакции - присутствуют ли в образцах микромицеты в целом, а также Candida spp.; во второй - к какому из трех родов (Aspergillus, Fusarium или Trichophyton) принадлежат исследуемые микромицеты. Праймеры для амплификации 18S-5.8S-28S фрагментов рДНК грибов родов Aspergillus, Fusarium и Trichophyton были выбраны на основе базы нуклеотидных последовательностей NCBI с использованием компьютерной программы для анализа ДНК-последовательностей Vector NTI. Панфунгальные праймеры для выявления всех клинически значимых грибов и пара праймеров для обнаружения Candida spp. были ранее опубликованы. Определение продуктов ПЦР проводили с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Клиническую чувствительность и специфичность ПЦР-теста оценивали по отношению к КОН-микроскопии, которая, на сегодняшний день является «золотым стандартом» лабораторной диагностики онихомикоза.

Результаты. Систему протестировали на 41 образце ногтевых пластинок больных с клиническим диагнозом «онихомикоз кистей и стоп». В исследовании использовали материал от больных, обратившихся в микологическую клинику НИИ медицинской микологии им. П.Н.Кашкина в период с мая 2012 г. по февраль 2013 г. По предварительной оценке, клиническая чувствительность ПЦР-теста по отношению к КОН-микроскопии составила 84%, а специфичность - 67%. Низкое значение специфичности связано с тем, что у 25% от всех положительных по ПЦР-тесту образцов не был выявлен мицелий при микроскопии.

Выводы. Разработана мультиплексная ПЦР-системя для обнаружения и идентификации патогенных грибов четырех родов - Trichophyton, Aspergillus, Fusarium и Candida. Низкая клиническая специфичность ПЦР-теста может быть связана с тем, что ее оценивали по отношению к КОН-микроскопии, чувствительность которой, в настоящий момент, является предметом дискуссий. Для более точной оценки чувствительности и специфичности ПЦР-теста требуется проведение исследования на большем количестве случаев с наблюдением клинической картины заболевания и эффективности лечения антимикотическими препаратами.

2013

Full conference title: 

RUSSIAN-CHINESE SCIENTIFIC-PRACTICAL CONFERENCE ON MEDICAL MICROBIOLOGY AND CLINICAL MYCOLOGY (XVI KASHKIN READING)
    • All Russian CMMCM XVI