ОСОБЕННОСТИ МОДЕЛИРОВАНИЯ АСПЕРГИЛЛЁЗА ЛЕГКИХ У МЫШЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВИРУЛЕНТНОСТИ ШТАММОВ ASPERGILLUS FUMIGATUS (PECULIARITIES OF PULMONARY ASPERGILLOSIS MODELING IN MICE LUNGS DEPENDING ON THE VIRULENCE OF ASPERGILLUS FUMIGATUS STRAINS)

Васильева Н.В., Богомолова Т.С., Степанова А.А., Босак И.А., Выборнова И.В., Филиппова Л.В.
Vasilyeva N.V., Bogomolova T.S., Stepanova A.A., Bosak I.A., Vybornova I.V., Filippova L.V.

Author address: 

НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of North-West State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia

Abstract: 

Цель работы - разработать модель инвазивного аспергиллёза лёгких у мышей и отобрать тест-штамм A. fumigatus на основании культуральных и гистологических исследований.

Материалы и методы. В качестве экспериментальных животных были выбраны самцы линейных мышей Balb/С с массой тела 18-22 г.

В качестве иммуносупрессора был выбран цитостатический препарат - циклофосфан. Экспериментальным животным внутри-брюшинно вводили препарат в дозе 200 мг/кг в 3, 0 и 1 дни эксперимента (метод 1) и 150 мг/кг в 3, 0, 4, 8 и 12 день эксперимента (метод 2). Количество лейкоцитов периферической крови и лейкоцитарную формулу крови животных определяли перед первым введением циклофосфана, затем каждые 4-е сутки в течение 14 дней.

Штаммы A. fumigatus РКПГ F 1172, РКПГ F 1248, РКПГ F 1267, РКПГ F 1277, РКПГ F 1384, были получены из «Российской коллекции патогенных грибов» НИИ медицинской микологии им. П.Н. Каш-кина СЗГМУ им. И.И. Мечникова. Культуры A. fumigatus были выделены из патологического материала пациентов с инвазивным аспергиллезом легких.

Заражение животных проводили путём интраназального введения наркотизированным животным 50 ^l взвеси спор грибов в концентрациях 1 104 -1 107 КОЕ/мл.

Для гистологического исследования легкие погибших животных фиксировали в формалине, срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Гомори-Грокотту и PAS-методом.

Результаты. При выборе схемы иммуносупрессии было установлено, что перед первым введением циклофосфана количество лейкоцитов в первой группе (метод 1) составило 10,17±2,35 1 09/л, нейтрофилов - 3,03±0,38109/л, во второй группе (метод 2) -

11,83±0,99109/л и 3,43±0,66 109/л соответственно. В момент заражения количество лейкоцитов в первой группе составило 1,6109/л, нейтрофилов - 0,37±0,09-109/л, во второй - 2,00±0,44 109/л и 0,51±0,09-10э/л соответственно. В первой группе, на шестой день после первого введения циклофосфана, у мышей развился аграну-лоцитоз: количество лейкоцитов снизилось до 0,57±0,13109/л, ней-трофилов - до нуля. Данное состояние привело к гибели 6 экспериментальных животных. Состояние лейкопении на фоне нейтро-пении у животных второй группы поддерживалось на протяжении всего эксперимента.

Определением заражающей дозы при интраназальном введении показано, что при инокуляции 50 мкл взвеси концентрацией 1-10® КОЕ/мл высев из лёгких животных, умерщвленных через два часа после заражения, составил 64166±8775 КОЕ/г.

Максимальную гибель животных через 14 дней после заражения суспензией 1106 КОЕ/мл вызвал штамм1267 (выжило 2 мыши из 10). После заражения штамм 1384 к этому сроку выжило 4 мыши, при заражении остальными штаммами - по 5 животных. Данные культуральных исследований приведены в таблице.

Количественные высевы из лёгких экспериментальных животных

Таблица
Штамм    Культуральные исследования, КОЕ/г
1172    0-130
1248    0-2470
1267    0-2600
1277    0-42300
1384    0-10000

При гистологическом исследовании легких животных, зараженных штаммами 1172 и 1274, очаги аспергиллеза не выявили. При заражении штаммом 1248 наблюдали очаги некроза с радиальным ростом гиф аспергилла у двух из 4-х исследованных животных, при заражении штаммом 1267 - у одного из 8-ми животных, при заражении штаммом 1384 - у одного из 9-ти животных.

При увеличении концентрации спор грибов во взвеси для заражения до 1107 КОЕ/мл закономерно возрастало количество микро-мицетов в легких (5,6-102-1,5-105 КОЕ/г). Количество очагов поражения при гистологическом исследовании в 70% наблюдений составило 3-7 на срезе.

Выводы. Для введения лабораторных животных (мышей) в состояние иммуносупрессии целесообразно 4-х кратное внутрибрю-шинное введение циклофосфана в дозе 150 мг/кг с контролем лейкоцитарной формулы крови. Интраназальное введение инокулюма является оптимальным при моделировании экспериментального аспергиллеза легких у мышей (линия Balb/С). При моделировании экспериментального аспергиллеза легких у мышей необходимо учитывать особенности различных штаммов микромицетов.

2014

Full conference title: 

RUSSIAN-CHINESE SCIENTIFIC-PRACTICAL CONFERENCE ON MEDICAL MICROBIOLOGY AND CLINICAL MYCOLOGY (XVII KASHKIN READING)
    • All Russian CMMCM XVII