БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ИЗБРАННЫХ ASPERGILLUS SPP. (THE BIOLOGICAL PECULIARITIES OF SOME SELECTED ASPERGILLUS SPP.)

Игнатьева С.М.1, Бабенко Г.А.1, Гурьева А.С.2, Галкина П.К.2, Спиридонова В.А.1
Ignatyeva S.M1., Babenko G.A.1, Gurieva A.S.2, Galkina P.K.2, Spiridonova V.A.1

Author address: 

1НИИ Медицинской микологии им. П.Н.Кашкина ГОУ ДПО СПб МАПО; 2Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of SEI APE SPb MAPE; State University, Saint Petersburg, Russia

Abstract: 

Цель исследования - изучить биологические свойства метаболитов некоторых микромицетов рода Aspergillus, имеющих медицинское значение.

Материалы и методы. Объектами исследования были 4 вида Aspergillus из Российской коллекции грибов НИИ медицинской микологии: A. fumigatus шт. ВКПГУ -1168, A. flavus шт. ВКПГУ-1071, A. niger шт. ВКПГУ - 1085, A. nidulans шт. ВКПГУ - 44/227. Глубинное культивирование выбранных штаммов грибов проводили на жидкой питательной среде Чапека-Докса с 2% глюкозы в течение 30 дней при температуре 27 °С. Посевной материал (105-107 спор/мл) помещали в качалочные колбы со средой и встряхивали на шуттель-аппарате в течение всего срока ферментации. На разных сроках выращивания биомассу грибов отделяли центрифугированием при 3000 об/мин. в течение 15 мин., а в нативном растворе определяли величину рН, содержание белка, фосфолипазную (чашечный метод с 2% лецитином) и протеолитическую активности (колориметрический метод с 2% казеином). Наличие галактоманнана определяли с помощью иммуноферментной тест-системы «Platelia Aspergillus EIA» (фирма «Bio-Rad», США).

Результаты. Все виды Aspergillus spp. продуцировали галактоманнан на ранних сроках выращивания с максимальной концентрацией его на 2 сутки ферментации. В процессе культивирования Aspergillus spp. выделяли внеклеточные белковые метаболиты, обладающие фер-
ментативной активностью. При этом первыми секрети-ровались фосфолипазы (на 3-5 день культивирования), а синтез протеаз начинался позже (на 7-10 сутки). Наибольшей фосфолипазной активностью обладали виды A. niger и A. fumigatus, продуцирующие ферменты на протяжении всего срока выращивания грибов, в отличие от видов A. nidulans и A. flavus, у которых фосфолипазы обнаруживали только на ранних стадиях культивирования.

При исследовании протеолитической активности у видов Aspergillus spp., выявили, что A.fumigatus, A. flavus, A. nidulans и A. niger способны к продукции протеаз, имеющих различный оптимум активности. Наибольшим набором (4 типа) ферментов с широким диапазоном действия от 2,5 до 9,5 обладал A. fumigatus, который один из всех видов аспергиллов секретировал щелочную протеазу с оптимумом активности при рН 9,5. Наличие у A.fumigatus ферментов с широким спектром действия, по-видимому, обусловливает его способность гидролизовать многие субстраты. У A. flavus выявили 2 кислые протеазы с оптимумом активности при рН 2,5; 5,5 и одну нейтральную про-теазу с оптимумом активности при рН 7,2. Активности 3-х протеаз у A. niger были максимальными при рН 2,5; 5,5 и 7,2, в то время как A. nidulans секретировал только 2 кислые протеазы (при рН 2,5 и 5,5) и не продуцировал нейтральные протеиазы.

Выводы. Глубинное культивирование Aspergillus spp. оказалось хорошей моделью для изучения динамики метаболизма возбудителей аспергиллезной инфекции и понимания ее патогенетических механизмов. В процессе клеточного роста штаммы Aspergillus spp. отличались своеобразием развития, выделяя в питательную среду биологически-активные вещества полисахаридной и белковой природы. На ранних сроках выращивания грибов (2 сутки) синтезировался внеклеточный галактоманнан, с 3 суток начиналась секреция фосфолипаз, а с 7 суток -протеаз. Виды Aspergillus spp. характеризовались продукцией индивидуального набора протеаз, их активностью в различных диапазонах рН и временем максимальной секреции. Щелочная протеаза была видоспецифична для A.fumigatus.

2009

Full conference title: 

RUSSIAN-CHINESE SCIENTIFIC-PRACTICAL CONFERENCE ON MEDICAL MICROBIOLOGY AND CLINICAL MYCOLOGY (XII KASHKIN READING)
    • All Russian CMMCM XII